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细胞学堂 |如何养好SH-SY5Y细胞,SH-SY5Y细胞培养有哪些细节要注意

来源:Procell  浏览量:  发布时间:2021-11-30 16:46:59

SH-SY5Y细胞1970年构建,是骨瘤转移灶的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系经3次克隆后得到的亚系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。如今SH-SY5Y细胞经是科学研究中最常用的细胞系之一了。


但很多人在SH-SY5Y细胞培养的过程中,总会遇到各种问题。今天,普诺赛来为大家一 一解答。

SH-SY5Y细胞基本信息

SH-SY5Y细胞基本信息 

▲产品详情  细胞系:SH-SY5Y 培养基:CM-0208


SH-SY5Y细胞培养常见问题及解决方案


收货篇    

常温运输过程中,细胞不免受到震荡和温度变化的影响,出现皱缩、聚团甚至脱落的现象。遇到这种情况,不用紧张,只要正确处理,细胞就能恢复正常生长。


收货时皱缩

常温细胞收货后,把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时即可。如果4小时后细胞仍然没有铺展开,密度适中的前提下可以静置过夜(过夜前倒出部分培养基,留5-10mL在瓶中,瓶盖拧松)。

收货时聚团

常温细胞收货后,先把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时以稳定状态,再进行传代。传代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。

收货时脱落

常温细胞收货后,先把细胞放进细胞培养箱静置2-4小时以稳定状态再处理。脱落后的细胞通常聚团漂浮,通过离心将漂浮的细胞团收集起来,在离心管里进行胰酶消化后重新铺板即可。

贴壁细胞常规方法消化下来,和处理好的脱落细胞合并,混匀后铺板。

SH-SY5Y脱落处理步骤:

1.    1200rpm(约250g)3min离心收集细胞,去除旧培养基;

2.    PBS 重悬细胞,再次 1200rpm(约250g)3min离心,去除PBS;

3.    加入 1mL左右 0.25%胰酶重悬细胞,吹打1-2下吹起沉淀即可;

4.    放入细胞培养箱约 1-3min;

5.    用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散;

6.    迅速加入 3-5mL含血清的培养基混匀以终止消化;

7.    1200rpm(约250g)3min离心,去除胰酶;

8.    加入新鲜培养基按合适比例接入无菌培养器皿中;

SH-SY5Y收货时皱缩、脱落

SH-SY5Y细胞收货时皱缩、脱落

  SH-SY5Y处理后第三天

SH-SY5Y细胞处理后第三天

SH-SY5Y细胞培养篇

SH-SY5Y细胞生长缓慢。在细胞培养过程中,有以下几点需要注意。

 

能否使用DMEM/F12

MEM/F12和DMEM/F12都可以培养SH-SY5Y细胞培养,并且都有相应的文献支持。但这两种培养基培养出来的形态会有细微差异。 另外,使用品质好的胎牛血清将极大改善细胞生长状态。

培养基容易变黄

因其神经母细胞瘤的特性,SH-SY5Y细胞成簇生长,饱和密度大。有时显微镜下看着密度不高,但细胞簇实际密度大,所以细胞培养基很快就变黄了。这时候,需及时换液。

生长异常缓慢

SH-SY5Y细胞培养一周都无法传代时,可以将细胞消化下来,接种到更小的容器中,人为增加细胞密度,从而促进细胞生长。平时传代时也要注意接种密度不能太低。

传代注意事项

不建议连续消化细胞,连续消化细胞会导致细胞状态变差。传代时消化时间不宜过长,通常1-3min即可,若细胞解离太快可适当用PBS稀释胰酶。吹打细胞时,动作轻缓一些,减少对细胞的物理刺激。  

SH-SY5Y正常生长照片

SH-SY5Y正常生长照片

形态篇

SH-SY5Y细胞培养时,贴壁细胞和悬浮细胞同时存在,贴壁细胞呈上皮样,有短触角延伸出来,倾向于成簇生长,容易成团。


悬浮细胞过多:SH-SY5Y细胞生长时有少量悬浮细胞,是正常现象。 如果出现大量悬浮的细胞,就需要引起注意了。

处理方法:换液时将悬浮细胞离心收集,新鲜培养基重悬后接种回原瓶/原皿。当贴壁细胞生长状态良好、密度适中时,可以舍弃悬浮细胞。

成团严重:SH-SY5Y细胞非常敏感,在受到温度、化学或物理刺激后容易出现成团现象。一个视野下,有少量成团现象,无需特殊处理。成团几乎没有铺展开的细胞时,就需要按以下方法特殊处理一下了。

成团较严重的SH-SY5Y细胞

成团较严重的SH-SY5Y细胞

处理方法

方法1:低密度接种,用0.125%的低浓度胰蛋白酶消化细胞(时间不超过5min),按1:6比例传代接种,并换新的培养器皿。 延长换液时间,3天换液一次,防止细胞脱落。

方法2:使用多聚赖氨酸包被的培养器皿,以加快细胞贴壁速度,降低细胞聚集成团的几率。

方法3:重新铺板,并更换新配制的培养基,并加大血清比例(不超过20%)

方法4:接种时,减少培养基量(如T25加3mL)以加快细胞贴壁速度,等待细胞贴壁后(约8-12小时),再补加培养基。

 

预防成团的方法:

Ø  控制细胞密度不超过80%,当密度到达或超过80%及时传代;传代时切勿暴力吹打,避免对细胞造成机械刺激

Ø  使用质量好的细胞培养基和胎牛血清,减少内毒素等有害物质对细胞的刺激

Ø  请勿频繁把细胞从培养箱拿出,气温低时需开暖气维持细胞房温度;使用PBS、培养基前37度预热,以避免温差对细胞造成刺激


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