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细胞学堂丨养不好RAW 264.7,是因为忽略了这几点,RAW264.7分化有哪些问题要注意

来源:Procell  浏览量:  发布时间:2021-12-01 13:51:56

养过RAW 264.7细胞系的小伙伴都容易为一个问题感到苦恼:它太容易分化了!到底怎样才能养好它呢?RAW264.7细胞培养注意事项有哪些今天我们就给大家分享一些心得。 

 

RAW264.7细胞培养之基础篇

RAW264.7细胞培养的第一步,是要对它的基础培养条件了如指掌,比如生长特性、细胞形态、所需的培养基,甚至培养环境、传代比例等等,做到知己知彼,才能百战百胜。

                               

RAW 264.7细胞系详情

▲产品详情  细胞系:RAW 264.7  培养基:CM-0190


RAW 264.7生长图片

RAW264.7细胞生长图片

 

RAW264.7细胞培养之进阶篇1

除了基础条件,其他外界因素也容易引起细胞的“小脾气”,比如运输路上的颠簸、传代方法等等。针对几种常见的问题,今天来一 一为大家解答。

 

问题1 :收货后,细胞不见了

普诺赛总是会收到这类反馈:收到细胞,期待值满满地打开包装准备细胞培养,但在显微镜下却找不到细胞!这是因为RAW 264.7 细胞贴壁较松,快递运输路上受到颠簸,可能会脱落。脱落的细胞悬浮在培养基中不容易聚焦。这时候不用担心,把细胞放进培养箱静置两个小时就可以看到了。如果静置后看到的细胞仍偏少,请将瓶子里的培养基都转移到离心管里,1200 rpm(约250g)离心3分钟,即可看到沉淀的细胞。细胞全部脱落,慌乱之下可能会一个细胞都找不着。这个时候离心验证是最好的方法。

 

问题2 :收货处理后,细胞不贴壁

将细胞离心收集,用新鲜的培养基重悬细胞放到新的细胞培养瓶里之后,可能会出现细胞成团漂浮、不贴壁的情况。这种情况下,把细胞离心收集,用1 mL培养基重悬,慢慢地,轻轻地吹打,直到细胞被吹成单细胞,就可以重新铺板了。RAW 264.7脱落后倾向于抱团,抱团时细胞是活着的,但很难贴壁。记得一定要把聚成团的细胞吹散成单细胞,不然细胞很难重新贴壁。

 

RAW264.7细胞培养之进阶篇2 

正确的传代方法是RAW264.7细胞培养的关键,每一步操作都要细致入微,稍有不慎细胞就分化了。RAW264.7细胞不能用胰酶消化,许多实验室用细胞刮传代,这是一种非常经典好用的方法。普诺赛在RAW264.7细胞培养这十几年里,摸索出一个更不错的方法:吹打传代吹打传代操作简单,对细胞培养的新手们更友好,也能更好地控制细胞分化率。


传代步骤

1)     轻拍几下培养皿

2)     用1ml的枪或者巴氏管把细胞吹下来(吹不下来的舍弃)

3)     细胞吹下来后转移到15ml离心管

4)     1200rpm (约250g)离心3min

5)     去上清,用新鲜培养基重悬细胞

6)     按比例接种到新的培养皿中


传代时机:

1)     当细胞密度较低的时候,可能不太好吹下来。

2)     当细胞密度达到80%~90%的时候,最容易吹下。


RAW 264.7推荐的传代密度

推荐的RAW264.7细胞传代密度


RAW 264.7细胞培养之终结篇

讲了那么多如何处理RAW264.7巨噬细胞分化的情况,那分化了的细胞到底是什么形态呢?

l  分化的细胞呈多角形,体积明显增大,时常有较长的黑色触角


分化的RAW 264.7

▲分化的RAW 264.7细胞形态

RAW264.7细胞培养注意事项

1.    我们发现,RAW264.7巨噬细胞三天不传代更容易分化,很难吹下,每一次接种密度都要控制好;

2.    分化的细胞贴壁牢固,传代的时候千万不要强制性吹下这些细胞,只接种容易吹下的那些未分化细胞;

3.    吹打的力度一定要轻,切勿暴力吹打;细胞的贴壁性和培养器皿的材料也有关,有时RAW264.7细胞会出现太容易吹下的情况,连分化细胞都贴壁较松,此时更适宜用巴氏管吹打;

4.    培养时,无法保证100% 不分化,通过传代可以将分化比例控制在一定范围

5.    RAW264.7细胞分裂活跃,记得每天看一看,周末也要抽点时间关心一下它哦~

 

小知识

RAW 264.7细胞系的起源

加利福尼亚索尔克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV(Abelson鼠科白血病病毒)诱发肿瘤的腹水中建立了RAW 264细胞系。他发现RAW 264可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖,并且能通过抗体依赖途径分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。RAW 264.7不分泌A-MuLV(但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清检测到病毒),对LPS非常敏感。该研究1978年发表在《CELL》杂志。 [2]

 

 

温馨提醒:

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