全国免费热线:400 650 3656

您身边的细胞培养专家!

忘记密码

个人邮箱:
验证码: captcha

账号激活

个人邮箱:
×
当前位置:首页 >> io游戏电竞 >> 实验技术视频

io游戏电竞Technical Support

联系我们CONTACT US

贴壁细胞的冻存

来源:admin  浏览量:  发布时间:2018-12-18 13:43:40


本视频为普诺赛贴壁细胞冻存操作指南,对每一步操作都做了演示,以便实验者更好地理解贴壁细胞冻存实验过程。

贴壁细胞冻存实验准备:
15mL离心管、冻存管、PBS缓冲液、移液管、电动移液器等物品提前放入生物安全柜中,紫外照射30min消毒灭菌;
细胞完全培养基、0.25%胰酶-0.02%EDTA、细胞冻存液等从4℃冰箱中取出后,复温至室温,备用;程序降温盒复温至室温备用。


贴壁细胞冻存操作步骤:
1. 从培养箱中取出准备冻存的细胞;
2. 显微镜下观察细胞状态并拍照记录;
3. 酒精消毒培养瓶后放入安全柜中;
4. 吸去多余的培养基,加人2~3ml PBS缓冲液润洗一次;
5. 加入1ml胰酶,放入37℃消化;
6. 消化1min左右,在显微镜下观察细胞消化情况;  
7. 消化完全后,加3ml完全培养基终止;
8. 将细胞悬液移入15ml离心管中离心,1000rpm/min(约200g)离心3-5min;
9. 吸去多余的液体,向细胞沉淀中加入适量的冻存液,轻轻吸打混匀;
10. 按比例分装至冻存管中;
11. 贴好标签后放入梯度冻存盒中;
12. 将冻存盒放入-80℃,降温过夜后,移入液氮中保存。


注意事项:
1)细胞冻存液需提前配制,不可直接将DMSO加入细胞悬液中;
2)不同细胞消化时间有差异,以实际镜检结果为准,大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化,消化时间不宜过长;
3)应选择汇合度80%-90%左右,细胞处于对数生长期时进行冻存操作,确保细胞冻存时状态最佳,冻存密度可根据细胞特性进行调整;
4)冻存细胞保存温度应低于-130℃,不可在-80℃长期保存。

 

朱莎莉

朱莎莉

【 湖北、河南 】

刘本佳

刘本佳

【 江苏、上海、安徽 】

章臣雄

章臣雄

【 广东、广西、贵州、云南 】

閤春喜

閤春喜

【 四川、重庆、陕西、甘肃、西藏 】

石文平

石文平

【 北京、黑龙江、吉林、辽宁 】

任施博

任施博

【 江西、福建、新疆、海南 】

李荣枫

李荣枫

【 天津、河北、内蒙古、山西 】

陈雨兰

陈雨兰

【 湖南、山东、宁夏、青海 】

田庆如

田庆如

【浙江】

黄龄

黄玲

【 山东、湖南、四川、陕西、甘肃、重庆、西藏、浙江 】

李欢欢

李欢欢

【 江苏、安徽、上海、河北、山西、天津、内蒙古 】

周璇

周璇

【 广东、广西、贵州、云南、福建、海南、江西、新疆、宁夏、青海 】

卢丽丽

卢丽丽

【 湖北、河南、北京、辽宁、吉林、黑龙江 】